- Giải thưởng Toán học Fields 2022
- Tân Kỹ sư, Kiến trúc sư và Cử nhân Chương trình Tiên tiến & Quốc tế nhận bằng Tốt nghiệp
- 5 anh em trong đại gia đình cùng chọn học ĐH Duy Tân
- Sinh viên Đại học Duy Tân tham dự Hội thảo “Cập nhật Công nghệ mới cùng Bản Viên”
- Nguyễn Anh Tài - sinh viên ngành kiến trúc công trình
- Nguyên tắc của phương pháp này là các acid amin thơm như tryptophan, tyrosine và phenylalanine trong chuỗi polypeptide có phổ hấp thụ cực đại ở bước sóng 280nm.
- Sử dụng BSA làm chất chuẩn, biết rằng ở bước sóng 280nm 1ml BSA có nồng độ 1mg/ml sẽ có mật độ quang học là OD = 0,67. Dựa vào đó có thể xác định hàm lượng protein trong các mẫu thí nghiệm theo công thức sau:
Y(mg) = ([OD].a.V)/0,67
Trong đó:
+ [OD]: mật độ quang học của 1ml dung dịch mầu.
+ V: thể tích dung dịch mầu.
+ a: độ pha loãng dung dịch.
Chú ý:
1. Con số 0,67 là hệ số tắt của BSA. Để xác định nồng độ các loại protein khác thì cần phải sử dụng hệ số tắt tương ứng đối với mỗi loại protein. Ví dụ: hệ số tắt của protein con A là 1, 2.
2. Lựa chọn các protein tiêu chuẩn cần có cấu trúc tương tự như cấu trúc của các protein cần đo xét nghiệm ở mẫu nghiên cứu vì các protein thường có hệ số tắt khác nhau ở bước sóng 280nm (Hệ số tắt biểu thị bằng sự hấp thụ của dung dịch 1% protein đối với một tia sáng có bề dày 1cm). Thêm vào đó, các protein có cấu trúc khác nhau cũng cho khả năng tạo phản ứng mầu khác nhau với các thuốc thử tạo mầu như thuốc thử folin – ciocalteu, coomassie brilliant blue G 250.
Sau đây là bảng cho các giá trị hệ số tắt (E2801%, nghĩa là sự hấp thụ của dung dịch 10mg protein/ml ở bước sóng 280nm) đối với một số loại protein khác nhau:
Bảng 3.1.Hệ số tắt của một số protein ở bước sóng 280nm
(theo Fashman, 1976)
|
Các protein |
E2801% |
|
IgG |
13,6 |
|
IgM |
11,8 |
|
IgA |
13,2 |
|
IgA tiết |
13,1 |
|
IgD |
17,0 |
|
IgE |
15,3 |
|
Chuỗi γ |
13,7 |
|
Chuỗi µ |
13,9 |
|
Chuỗi α |
15,5 |
|
Chuỗi nhẹ |
12,3 |
|
Fab |
15,0 |
|
Fc |
12,0 |
|
VH |
27,0 |
|
Con A (lectin Canavalia ensiformis) |
12,0 |
|
Lectin Lens culinaris (LCA) |
12,5 |
|
BSA |
6,7 |
3. Nếu chưa biết hệ số tắt của protein, hoặc dung dịch gồm hỗn hợp của một số dạng protein thì nồng độ protein tổng số có thể được tính theo phương trình sau:
Nồng độ protein, tính theo mg/ml = 1,55 x A280 – 0,77 x A260
Trong đó:
+ A280 là giá trị hấp thụ ở bước sóng 280 nm.
+ A260 là giá trị hấp thụ ở bước sóng 260 nm.
4. Nếu tỉ lệ A280/A260 thấp hơn 0,6 nghĩa là dung dịch protein đã lẫn (nhiễm) axit nucleic, các peptit, chất tẩy rửa hoặc chất kháng khuẩn azit natri (NaN3). Trường hợp này cần sử dụng phép đo nồng độ protein theo kỹ thuật Lowry hoặc Bradford.
5. Dung dịch protein có nồng độ thấp hơn 0,1mg/ml thường cho kết quả không chính xác.
» Tin mới nhất:
- Giải thưởng Toán học Fields 2022 (19/07/2022)
- Tân Kỹ sư, Kiến trúc sư và Cử nhân Chương trình Tiên tiến & Quốc tế nhận bằng Tốt nghiệp (18/07/2022)
- 5 anh em trong đại gia đình cùng chọn học ĐH Duy Tân (18/06/2022)
- Sinh viên Đại học Duy Tân tham dự Hội thảo “Cập nhật Công nghệ mới cùng Bản Viên” (18/05/2022)
- Nguyễn Anh Tài - sinh viên ngành kiến trúc công trình (15/04/2022)
» Các tin khác:
- Xác định nồng độ protein hoà tan theo phương pháp Lowry (02/12/2015)
- Nobel Hóa học năm 2015 (16/11/2015)
- Ứng dụng của Anthocyanin (13/11/2015)
- Tổng quan về anthocyanin (13/11/2015)
- Học đại học: Sinh viên tới trường để điểm danh và ngủ (05/11/2015)
- Vai trò và nhu cầu của Clo đối với cơ thể người. (18/10/2015)
- Một số hình ảnh đội tuyển trong kỳ thi Spho XVIII của sinh viên Duy tân (18/05/2015)
- Kết quả kỳ thi olympic vật lý Duy tân 2015 (18/05/2015)
- Thông tin đội tuyển SPHO Duy tân 2015 (18/04/2015)
- Thông tin sơ lược về lịch sử tham dự olympic vật lý Duy tân (18/04/2015)