a. Nguyên tắc

Phương pháp này dựa trên cơ sở phức chất đồng protein khử hỗn hợp photphomolipden – photphovonphramat (thuốc thử Folin – ciocalteu) tạo phức chất màu xanh da trời có độ hấp thụ cực đại ở bước sóng 660nm.

Cường độ màu của hỗn hợp phản ứng tỉ lệ thuận với nồng độ protein trong một phạm vi nhất định. Dựa vào mức độ hấp thụ quang học của protein chuẩn, ta có thể xác định được hàm lượng protein trong mẫu nghiên cứu.

b. Hoá chất cần dùng

- Dung dịch A: 4g NaOH (0,1M) và 20g Na₂CO₃ (2%) pha trong 1000ml nước cất.

- Dung dịch B: 0,5g CuSO­₄.5H₂­O (0,5%) pha trong dung dịch Natri Xitrat (1%) hoặc trong dung dịch Natri, Kali Tactơrat 1%.

- Dung dịch C: Hỗn hợp của hai dung dịch A và B theo tỉ lệ 49:1 (pha trước khi dùng).

- Thuốc thử folin, trước khi dùng pha loãng hai lần sao cho độ axit bằng 1N.

- Albumin huyết thanh bò 1mg/ml.

c. Cách tiến hành

- Mẫu thí nghiệm: lấy chính xác 0,5ml dịch chứa protein với hàm lượng thích hợp cho vào ống nghiệm, thêm vào đó 2ml dung dịch C, lắc đều để yên trong 10 phút. Sau đó thêm vào hỗn hợp trong ống nghiệm 0,25ml folin đã pha loãng 2 lần, lắc đều và để yên trong 30 phút, màu vàng của hỗn hợp chuyển sang màu xanh da trời và đạt đến cường độ màu cực đại. Đem so màu của hỗn hợp trên máy đo quang ở bước sóng 660nm. Xác định được trị số mật độ quang học (OD) của dung dịch nghiên cứu. Đo trên máy 3 lần lặp lại và lấy trị số trung bình.

- Mẫu đối chứng: 0,5ml đệm cho vào ống nghiệm, thêm vào đó 2ml dung dịch C và bước tiếp theo được tiến hành như mẫu thí nghiệm.

d. Xây dựng đường đồ thị chuẩn

Hàm lượng protein tan trong dung dịch được xác định theo phương pháp Lowry, dùng albumin huyết thanh bò (BSA) làm chất chuẩn.

Cân 0,01g (10mg – albumin huyết thanh bò) hoà tan trong 10ml nước, ta được dung dịch gốc có nồng độ là 1mg/ml. Sau đó pha loãng dung dịch gốc bằng nước cất với các nồng độ 20, 40, 60, 80, 100, 120 µg/ml để tiến hành xây dựng đồ thị chuẩn.

- Mẫu thí nghiệm: lấy chính xác 0,5ml dung dịch BSA ở nồng độ pha loãng như trên cho vào ống nghiệm, thêm vào mỗi ống 2ml dung dịch C để ở nhiệt độ phòng 10 phút, sau đó cho 0,25ml thuốc thử folin (1N) đem so mầu với bước sóng 660nm.

- Mẫu đối chứng: lấy 0,5 ml nước cất cho vào ống nghiệm, thêm vào đó 2ml dung dịch C và các bước tiếp theo được tiến hành như mẫu thí nghiệm.

Qua 3 lần lặp lại thí nghiệm có thể xây dựng đường hồi quy. Kết quả được xử lý theo phương pháp thống kê thông thường.

Ta có phương pháp hồi quy.

y = 0,55066844x + 0,01791961. 

Vẽ đồ thị chuẩn biểu diễn sự phụ thuộc của OD với hàm lượng protein. 

Dựa vào đồ thị chuẩn, có thể xác định được hàm lượng protein trong mẫu nghiên cứu.

» Tin mới nhất:

• Giải thưởng Toán học Fields 2022 (19/07/2022)
• Tân Kỹ sư, Kiến trúc sư và Cử nhân Chương trình Tiên tiến & Quốc tế nhận bằng Tốt nghiệp (18/07/2022)
• 5 anh em trong đại gia đình cùng chọn học ĐH Duy Tân (18/06/2022)
• Sinh viên Đại học Duy Tân tham dự Hội thảo “Cập nhật Công nghệ mới cùng Bản Viên” (18/05/2022)
• Nguyễn Anh Tài - sinh viên ngành kiến trúc công trình (15/04/2022)

» Các tin khác:

• Nobel Hóa học năm 2015 (16/11/2015)
• Ứng dụng của Anthocyanin (13/11/2015)
• Tổng quan về anthocyanin (13/11/2015)
• Học đại học: Sinh viên tới trường để điểm danh và ngủ (05/11/2015)
• Vai trò và nhu cầu của Clo đối với cơ thể người. (18/10/2015)
• Một số hình ảnh đội tuyển trong kỳ thi Spho XVIII của sinh viên Duy tân (18/05/2015)
• Kết quả kỳ thi olympic vật lý Duy tân 2015 (18/05/2015)
• Thông tin đội tuyển SPHO Duy tân 2015 (18/04/2015)
• Thông tin sơ lược về lịch sử tham dự olympic vật lý Duy tân (18/04/2015)
• Phương pháp thu nhận pepsin từ màng nhầy dạ dày động vật (17/03/2015)